1樓：網友
在鹼性溶液中，雙縮脲(h2n-co-nh-co-nh2)與二價銅離子作用形成紫紅色的絡兆漏合物，這一反應稱雙縮脲反應。凡分子中含二個或二個以上醯胺基(—co-nh2)，或與此相似的基團[如—ch2-nh2，—cs-nh2，—c(nh)nh2]的任何化合物，無論這類基團直接相連還是通過乙個碳或氮原子間接相連，均可發生上述反應。蛋白質分子含有眾多肽鍵(—co-nh—)，可發生雙縮脲反應，強度在一定濃度範圍內與肽鍵數量即與蛋白質含量成正比，可用比色法測定蛋白含量。
測定範圍為1～10mg蛋白質。干擾這一測定的物質主要有：硫酸銨、tris緩衝液和某些氨基酸等。
此法的優點是較快速，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，以及干擾物質少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用於快速，但並不需要十分族枯爛精確的蛋白質測定。
三、實驗試劑和器材。
試劑]1．雙縮脲試劑： 取cuso4·5h20(和酒石敗伍酸鉀鈉(以少量蒸餾水溶解，第 2 頁。
再加 naoh溶液300ml，ki ，然後加水至1000ml。棕色瓶中避光儲存。長期放置後若有暗紅色沉澱出現，即不能使用。
2．標準蛋白質溶液： 用標準的結晶牛血清清蛋白（bsa）或標準酪蛋白，配製成10g/l的標準蛋白溶液，可用bsa濃度1g/l的a280為來校正其純度。如有需要，標準蛋白質還可預先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計算出其純度，再根據其純度，稱量配製成標準蛋白質溶液。
牛血清清蛋白用h2o 或配製，酪蛋白用 naoh配製。
雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是什麼?
2樓：小何學姐
蛋白質分子中含有很多和雙縮脲結構相似的肽鍵。
因此也能起雙縮脲反應，形成紅紫色絡合物。
雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲，由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能與銅離子。
在鹼性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時，試液中的銅與多肽配位，絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度。
雙縮脲法測定蛋白質的優缺點：
優點：雙縮脲法測定蛋白質的測定範啟爛腔圍是1~10mg蛋白質，操作簡單、歷培快捷。既適合手工操作，又適合自動化分析，重複性好、線性關係好，雙縮脲試劑可以長期儲存。
缺點：靈敏度差，測定範圍窄，樣品需要量大，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，因此它常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。
干擾測定的物質包括有：在性質上是氨基酸。
或肽的緩衝液，如tris緩衝液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉澱。
雙縮脲法測定蛋白質含量
3樓：司澤南聿
雙縮脲法測定蛋白質含量實驗方法如下：
實驗目的：1.掌握分光光度計的使用方法。
2.掌握標準管法測物質含量的方法。
3.掌握雙縮脲法測定蛋白質含量的方法。
一、原理：雙縮脲是由兩分子尿素縮合而成的化合物，在鹼性溶液中與硫酸銅反應生成紫紅色絡合物，此反應即為雙縮脲反應。含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物都具有雙縮脲反應。 蛋白質含有多個肽鍵，在鹼性溶液中能與cu 2+ 絡合成紫紅色化合物。
其顏色深淺與蛋白質的濃度 成正比，可以用比色法進行測定。雙縮脲法最常用於需要快速但並不需要十分精確的測定。
二、 試劑 和器材。
試劑 :1) 標準蛋白溶液（5mg/ml）:準確稱取已定氮的酪蛋白(乾酪素或牛血清白蛋白)用0．05mol/l氫氧化鈉溶液配製，冰箱存放備用。
2) 雙縮脲試劑：溶解硫酸銅（cuso 4 ·5h 2 o）和酒石酸鉀鈉（nakc 4 h 4 o 6 ·4h 2 o）於500ml蒸餾水中，在攪拌下加入300ml10％氫氧化鈉溶液，用水稀釋到1000ml，貯存於內壁塗以石蠟的瓶內。此試劑可長期儲存。
3) 樣品血清：動物血清用水稀釋10倍，置於冰箱儲存備用。標準曲線法所用的血清需20倍稀釋。
器材：分析天平、分光光度計、 恆溫水浴箱、 試管 、 吸量管等。
三、操作方法：
1、取三支 試管 按下表操作。
2、搖勻，37℃ 水浴 20min後用 分光光度計 於540nm波長處比色，以空白管調零點，測得各管吸光度。
3、計算：血清 總蛋白 質(g／100ml）＝a 測 /a 標 ×
雙縮脲法測定蛋白質含量計算
4樓：教育學堂
雙縮脲法測定蛋白質含量計算如下：
學習雙縮脲法測定蛋白質的原理和方法。
實驗原理：具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應。在鹼性溶液中雙縮脲與銅離子結合形成複雜的紫紅色複合物。
而蛋白質及多肽的肽鍵與雙縮脲的結構類似，也能與銅離子形成紫紅色配位化合物，其最大光吸收在540nm處。
其顏色深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質的相對分子質量及氨基酸的組成無關，該法測定蛋白質的濃度範圍適用於1~10mg/ml，雙縮脲法常用於蛋白質的快速測定。
實驗操作：取雙縮脲試劑、10mg/ml的標準蛋白溶液和待測蛋白溶液（稀釋10倍的人血清），按下表配製6支溶液：
紫外吸收測定法目的要求：瞭解紫外吸收法測定蛋白質含量的原理。
掌握紫外分光光度計的使用方法。
實驗原理：蛋白質分子中所含酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，使蛋白質在280nm 波長處有最大吸收值。在一定濃度範圍內，蛋白質溶液的光吸收值（a280）與其含量成正比關係，可用作定量測定。
紫外線吸收法測定蛋白質含量的優點是迅速、簡便，不消耗樣品，低濃度鹽類不干擾測定。因此。廣泛應用在柱層析分離中蛋白質洗脫情況的檢測。
此法的缺點是∶（1）對於測定那些與標準蛋白質中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質，有一定的誤差。（2）若樣品中核酸等吸收紫外線的物質，會出現較大的干擾。不同的蛋白質和核酸的紫外線吸收是不同的，即使經過校正，測定結果也還存在一定的誤差。
雙縮脲法測定蛋白質含量需注意哪些問題
5樓：
在使用雙縮脲試劑時候，必須注意，必須是先加 g/ml氫氧化鈉溶液，再加 g/ml硫酸銅的水溶液。若先加入硫酸銅溶液，再加入氫氧化鈉溶液，則無法充分製造鹼性環境，此時硫酸銅會與氫氧化鈉發生複分解反應，生成藍色氫氧化銅沉澱，導致現象不清，無法較好地達到實驗目的。 2、蛋白質濃度：
雙縮脲法測定蛋白質含量需注意哪些問題。
雙縮脲法測定蛋白質含量需注意哪些問題您好親，為您推薦相關資訊：1、鹼性環境： 在使用雙縮脲試劑時候，必須注意，必須是先加 g/ml氫氧化鈉溶液，再加 g/ml硫酸銅的水溶液。
若先加入硫酸銅溶液，再加入氫氧化鈉溶液，則無法充分製造鹼性環境，此時硫酸銅會與氫氧化鈉發生複分解反應，生成藍色氫氧化銅沉澱，導致現象不清，無法較好地達到實驗目的。 2、蛋白質濃度： 雙縮脲法常用於含量的蛋白質溶液測定。
你好親，雙縮脲法測定蛋白質含量的干擾因素有哪些：雙縮脲法測定蛋白質含量的干擾因素有三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和edta。雙縮脲法是乙個用於鑑定蛋白質的分析方法。
雙縮脲試劑是乙個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。當底物中含有肽鍵時，試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。
為什麼雙縮脲在鹼性環境中能與Cu2 作用
具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產生紫色反應。蛋白質的肽鍵在鹼性溶液中能與cu 絡合成紫紅色的絡合物。顏色深淺與蛋白質濃度成正比。因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時，試液中的銅與多肽配位，絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為nm。鑑定...
斐林試劑和雙縮脲試劑有什麼區別，斐林試劑 雙縮脲試劑的區別
1 作用不同 斐林試劑是新配製的溶液，它在加熱條件下與醛基反應，被還原成磚紅色的沉澱，可用於鑑定可溶性還原糖的存在。用斐林試劑鑑定可溶性還原糖時，溶液的顏色變化過程為 淺藍色 棕色 磚紅色 沉澱 鑑定生物組織中是否含有蛋白質時，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑，發生的是雙縮脲反應。雙縮脲反應實質是在...
斐林試劑，雙縮脲中Naoh的作用分別是什麼？（別複製）
哎呀沃去 雙縮脲試劑與蛋白質反應的實質其實是與肽鍵反應雙縮脲試劑分為a液與b液.該反應需在鹼性環境下完成.a為氫氧化鈉.雙縮脲試劑其實是在利用鹼性條件下的二價銅離子.01 g ml的水溶液,b為硫酸銅,以免藍色的氫氧化銅蓋住了紫色複合物的紫色導致觀察失敗,1.斐林試劑主要是利用兩者反應後的氫氧化銅溶...