在做轉基因實驗時，怎樣從基因組文庫中提取目的基因？

1樓：路悅欣偉穰

得，我你的追問哈。

用內切酶切割的dna，就是第一步提取的全基因姿衫埋組。

我多嘴幾句：

你的標題問的是基因文庫。這涉及到構建某細胞的全基因組文庫的問題，當構建文庫完成後，可以根據目的基因的特性，進行提取。

構建全基因組塌納文庫：對進行提取基因組dna，然後用酶切，用適當的載體對酶切產物隨機整合，然後將整合後的重組載體，轉化入宿主細跡螞胞。（一般沒個宿主細胞只能吸收乙個重組載體，這是細胞的特性。

然後根據所需目的基因的轉錄翻譯產物進行鑑定，篩選出陽性轉殖，然後進行提取載體，再用之前的酶切，電泳分離目的基因片段。

2樓：盈玲瓏韋甜

大致步驟是：1.從供體中製備高純度的染色體基因組dna；2.

用合適的限制酶把dna切割成若干個片段；3.將這些片慎茄寬段分別與適當的載體分子進行體寬亮外連線；4.重組載體匯入受體細胞中或包裝成噬菌體，適宜條件下培養；5.

觀察培養基中的重組菌落或噬菌斑，篩選陽性轉殖，再將其轉殖中的目的基因提取分離出來即可納簡。

轉基因的具體步驟，從目的基因的獲得到最後的鑑定，謝謝

3樓：

1:目的基因的獲取。有三種方法（1）從基因文庫中獲取（2）利用pcr技術擴增目的基因（3）人工合成。

2：基因表達載體的構建。這個載體一般是質粒。

3：將目的基因匯入受體細胞。這個匯入植物細胞一般用農桿菌轉化法，也可用基因槍法或花粉管通道法。

匯入動物細胞一般用顯微注射法。匯入微生物細胞一般用感受態細胞吸收dna分子的方法。

4：目的基因的檢測與鑑定。這個分為4步：

1）用dna分子雜交技術檢測目的基因是否進入受體細胞（2）用分子雜交技術檢測目的基因是否轉錄出rna（3）用抗原抗體雜交技術檢測目的基因是否翻譯出蛋白質（4）進行生物個體水平的鑑定（這步不是一定的，也可不進行）。進行生物個體水平的鑑定舉個例子就是比如讓蟲子去啃食匯入抗蟲基因的植株，看是否抗蟲。

4樓：神a99我

目的基因複製出上千個——用基因槍匯入到受體細胞——組培——檢測。

培養攜帶目的基因的細菌——用攜帶基因的細菌侵染植物愈傷組織——組培——檢測。

5樓：平平淡淡了吧

4步，目的基因的獲取，表達載體的構建，將目的基因匯入受體細胞，目的基因的鑑測和鑑定。

6樓：念江攬月

在一樓的基礎上，加在一步之後優良載體的選擇。一般兩個都沒問題，看看問題怎麼問了。

基因文庫包括什麼，其中用到的反轉錄是什麼

7樓：秒懂**

反轉錄：以rna為模板，通過反轉錄酶，合成dna的過程。

如何檢測目的基因是否轉錄

8樓：聽風

檢測目的基因是否轉錄通常採用分子雜交的方法。

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以dna（基因）為模板生成mrna的過程，翻譯是以mrna為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mrna及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平：即轉錄水平上對特異mrna的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。

轉錄水平上的檢測主要方法是northern雜交，它是以dna或rna為探針，檢測rna鏈。和southern雜交相同，northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用rt-pcr（reverse transcribed pcr）方法檢測外源dna在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總rna或mrna為模板進行反轉錄，然後再經pcr擴增。如果從細胞總rna提取物中得到特異的cdna擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。

此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與northern雜交的實驗結果結合。

簡述植物基因組dna提取的原理

9樓：科技獼猴桃

正確答案：通常採用機械研磨的方稿高法破碎植物的組織和細胞，由於植物細纖敬行胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對dna的抽提產生不利的影響，在抽提緩衝液中需加入抗氧化劑毀譁或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易於破碎，並減少研磨過程中各種酶類的作用。