同源重組不長菌的原因，細菌同源重組機制

1樓：擎科生物

不長菌可能有以下幾個問題：

1)引物設計不正確：

引物須按照產品說明書要求設計，由兩部分組成：重疊區域（即同睜戚困源臂）+ 特異性引物。重疊區域的tm值儘量一致且＞60℃。

特別提醒，重疊區域不包括特異性引物，不能依據引物全長計算重疊區域的tm值。重疊區域長度不低於15bp，建議15-25bp，gc含量40%-60%；若同源臂的gc含量過高或過低，可重新選擇插入位點。

2)插入片段和線性化載仔啟體質量不佳：

若插入片悉念段和線性化載體不純，會抑制反應的進行，建議凝膠**純化後再進行實驗。值得提醒的是，使用質量低劣的瓊脂糖進行凝膠**，會對後續重組反應產生一定的影響。此外，切膠時應操作迅速，避免使用短波紫外損傷dna。

3)重組反應體系或條件不合適：

重組反應的體系與條件應符合說明書的要求，載體和插入片段的摩爾比為1:1-1:10，多片段連線時各片段摩爾比為1:

1。線性化載體用量在10-20 ng即可，勿新增過量或過少。

4)感受態細胞轉化效率低：

使用新制的或妥善凍存的感受態細胞，確保轉化效率＞107cfu/ug；連線產物體積不應超過感受態細胞體積的1/10，否則會降低轉化效率；建議選擇轉殖感受態，勿使用表達感受態。

5)平板抗生素使用錯誤或濃度過高；核查平板抗性以及濃度是否正確。

6)插入基因是否對感受態細胞具有致死作用。

2樓：網友

可能有幾個導致不長菌的原因：

1.感受態細胞是否失活：可以在下次實驗時加入陽性對照組，向同批感受態細胞中轉入陽性質粒以確認其活性；

2.抗性唯帶空藥物是否錯誤：重新行舉確認一下重組質粒的抗性，以免用錯抗性藥物進指瞎行菌落篩選，導致不長菌；

3.載體是否正常工作：可以向載體中連入其它已成功連線過的短片段，轉化感受態後觀察其菌落生長情況，以確定載體是否正常工作。

細菌同源重組機制

3樓：泰燦融朗麗

同源重組（homologus

recombination)

是指發生在姐妹染色單體（sister

chromatin)

之間或同一染色體上含有同源序列的dna分子之間或分子之內的重新組合。同源重組需要一系列的蛋白質催化，如原核生物細胞內的reca、recbcd、recf、reco、recr等；以及真核生物細胞內的rad51、mre11-rad50等等。同源重組反應通常根據交叉分子或holiday結構（holiday

juncture

structure)

的形成和拆分分為三個階段，即前聯會體階段、聯會體形成團卜判和holiday

結構的拆分。同源重組反應嚴格依賴dna分子之間的同源性，100%重組的dna分子之間的重組常見於姐妹塌改染色體之間的同源重組弊告，稱為homologous

recombination，而小於100%同源性的dna分子之間或分子之內的重組，則被稱為hemologus

recombination。後者可被負責鹼基錯配對的蛋白如原核細胞內的muts

或真核生物細胞內的msh2-3等蛋白質「」。同源重組可以雙向交換dna分子，也可以單向轉移dna分子，後者又被稱為基因轉換（gene

conversion)。由於同源重組嚴格依賴分子之間的同源性，因此，原核生物的同源重組通常發生在dna複製過程中，而真核生物的同源重組則常見於細胞週期的s期之後。