1樓:抽轉組
拷貝數計算根據下面就可以,很簡單的。拷貝數=(質量÷分子量)×。
每個明大雹鹼基的平均分子量是,質粒的分子量是,10μg質粒的摩爾數是10/2310440/1000000=,一摩爾等於,則10μg質粒有拷貝。
一對鹼基的分子量為660da,重量為1e-15μg,則10μg質粒拷貝數=10/(1e-15*3560)=分子。
例如pgem-t載體長3003bp,插入的目的片斷長162bp,每個鹼基的平均分子量激帆是330,(每對鹼基/bp是660,)質粒原液約250μg/ml,阿弗加德羅常數(每mol的微粒數)是。那麼每2μl的絕對模板數量是:=所以,10-4~10-7質粒的模板分子數是。
簡單的說:每ul質粒拷貝數=(質量/分子量)x(質粒濃度(ng/ul)x1ul]x10-9/[(質粒分子量+插入片仿空段分子量)x660]x(個/mol)。<
2樓:抽轉組
定量pcr是分析某個樣本段空中特定序列的數量。比如cdna中某個片段的拷貝數。
核算蛋白標定儀,如果這個指的是biophotometer,測a260,a230,a280的話測的是dna濃度,也就是說不管什麼片段,不管什麼長度,測出來的是總的dna含量。如果說第二個,我現在想不到更好的方法,市場上有精度更高的nanodrop儀器,也就是精度更高,原理是同樣的,基於dna在260nm和280nm波長吸收的峰值比來算的,至於樓主說的雜質,更多的是從dna提純的技術來解決的。你測的濃度準不準,在於你提純做的怎麼樣。
如果說的是第乙個,那麼目前技術已經有了,也就是nanostring。測得的是樣本中特定序列的拷貝數。注意是直接的測量而不是像定量pcr那樣通過ct值來推算。
這個技術和基因晶元。
的概念類似,是通過晶元上的乙個捕捉探針(capture probe)來捕捉你想測量的序列,(捕捉是通過鹼基互補配對。
捕捉以後,會加入乙個標記探針(reporter probe),這個標記探針也會互補結合你的目備嫌標序列。reporter probe後面連了乙個條形碼。
barcode)目前這個條形碼是六位,握滾瞎每個位置上有四種螢光標記物的選擇,為了保證儀器能夠更好的識別這個條形碼,這個公司目前的廣告是說一次可以同時測800個序列的拷貝數,實際還有更大的擴充套件空間。那麼都結合上了以後接下來怎麼辦呢,因為dna帶負電,加上乙個電場以後,因為捕捉探針是連在晶元上的,這些序列就會朝正極躺好,然後掃瞄一下,機器自己讀一下有多少條形碼就知道樣本里實際的拷貝數有多少了。<>
3樓:柒谷淘
最好是用帶有目的片段的質粒作標準曲線,因為質粒相對穩定,不易降解。你首先要選擇乙個16s rdna序列測定完畢的純菌,你可以從的環境樣品中隨便分離乙個細菌,用高保真酶擴增16s rdna保守區域(比如v3區),然後通過連線載體轉化後測序,然後你就知道這個片段(v3)的精確大小了。然後,重新用擴增那個細菌的這個片段(v3),pcr產物連線合適的載體(單轉殖質粒,並只有乙個轉殖位點的),連線成功後轉缺胡化,搖菌培養,然後從搖好的菌液中再提取這個帶有目的片段質粒。
下一步就是測定質粒的濃度和敗握純度了,測od值即可,一般來說260nm吸光度下,1od≈50mg/ml雙鏈dna,這樣你就知道了你提取的帶有目的片段的質粒的濃度了。因為載體的大小和目的片段(那個v3區)大小都已知,然後通過公式伏枯攔即可算出質粒的拷貝數,這個質粒的拷貝數和目的片段的拷貝數是一樣的。最後,將這個質粒進行5倍或是10倍的梯度稀釋,用這一系列的質粒上機螢光定量pcr做標準曲線就行了。
如何將dna進行絕對定量?
4樓:回憶
B肝dna檢查沒有任何意義,純粹是騙錢的化凳絕高驗。dna再高跟病情也沒有關係。我**了太多的病人dna資料八次方;九次方的,但病情很輕微。
很多病人dna是陰性的,但病情很嚴重。而且很多肝硬化、肝腹水的病人dna都是陰的。
dna檢查就是為了核苷類藥棗尺物的推銷而搞出來的乙個工具而已,但核苷類藥物**不了B肝,它的療效是被不良藥商吹出來的。
使用核苷類藥物巨集指**,病毒變異機會大,肝硬化程序會加快,已經有很多患者為此付出代價了,望你別再加入其中一員。雖然我這麼說,聽起來比較可怕,但事實就是這樣。 **了很多肝硬化患者當中,其中有相當大的一部分是使用核苷類藥物**後,致使轉化為肝硬化的,我這樣說沒別的意思,就是一點勸告各位患者,禁止服用核苷類藥物,如:
干擾素,拉公尺夫丁,賀普丁,阿德等各種核苷類藥物。還有服用核苷類藥物絕大多數停藥就**,要沒完沒了得吃,知道病毒變異再換藥。但話說回來也不是所有中草藥都能吃,中藥用不好也會傷肝,而且你還會對中醫失去信心。
現在社會上**肝病方面的庸醫和**很多,建議你要選擇在肝病**方面有豐富經驗,而且口碑良好的醫生。 如果碰到庸醫和**,錢化了還是小事,加重病情那是大事啊,這樣的患者見過很多,所以慎重擇醫很重要很重要。各位患者該醒醒了,別再給國外的藥品作試驗品了。
5樓:山藝媛
hbv-dna定量是B肝的檢查專案之一,hbv-dna的定量即檢測B肝病毒在血液中的含量。hbv-dna定量檢測結果主要是對抗病毒**提供檢測和療效參考。
hbv-dna參考值通常為小於1000拷貝/毫公升,hbv-dna含量越少越好。但是,實際上即使體內有B肝抗體的人體內也可能存在少量的hbv-dna,醫學上把體內hbv-dna不超過500的就算是正常的,hbv-dna只要不超過500就不會影響到健康。如果超過500就定為hbv-dna陽性,就要及時**了。
需要注意的是:hbv-dna檢測的結果大於正常值的話,就表明體內的B肝病毒含量很多,病毒的複製活躍,傳染性也相對較高。而且這個數值還和傳染性的強弱成正卜培比的關係。
但是,型橋唯hbv-dna檢測並不能顯示出病情的嚴重程度,如果要了解自己的病情,還是需要做肝功能檢查消悶。
乙肝病毒dna定量怎麼看,乙肝病毒DNA定量怎麼看
黃曼龍 1 68e 06意思是1.68乘以10的6次方提示體內病毒複製比較活躍,傳染性較強。但是否引起了嚴重的肝細胞損害,還要看肝功能和肝膽b超的檢測情況和患者的症狀,也就是說,dna不能表示疾病有多嚴重,只能表示病毒複製活躍程度。乙肝病毒雖然可以侵犯人體,能在人體肝細胞中進行復制,但本身對人體沒有...
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我認為你可以喝一些紅棗枸杞茶,也可以喝一些薑茶來暖暖肚子,很好的可以改善下腹疼痛的問題。要多喝熱水,注意飲食,不要經常熬夜,不要吃一些性寒的食物。選擇躺一會,也可以選擇喝一點熱水或者用熱水袋熱敷自己的肚子。我覺得可以喝點紅棗枸杞茶,也可以喝點薑茶暖胃,可以很好的改善下腹痛的問題。小腹疼痛要怎麼辦 小...